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ZC1014 树脂包埋(透射电镜)

“90分钟一 步法”ELISA试剂盒,节约时间,减少污染,避免误差,高效灵敏

实验收费标准:


项目编号项目名称计价单位单价

ZC1014

树脂包埋(透射电镜)

220元


实验结果展示:

树脂包埋(透射电镜).jpg


实验流程:

         1、取材:电镜取材非常严格,取材过程中速度要快,5分钟内要将组织取出放入固定液中;取材组织块要小,一般要求将组织切成1立方毫米大小;取材部位要准确、取材温度要低最好是在4℃条件下进行;取材工具要干净,锋利。如果是贴壁细胞不可用酶消化下来,先吸去培养液然后加入电镜固定液用橡胶块刮下细胞,离心,细胞体积保证绿豆大小即可,然后吸去上清更换固定液继续固定。

        2、固定:取材后要及时固定,组织、细胞、蛋白等固定选用2.5%中性戊二醛固定液,植物等标本则需要选用多聚甲醛和戊二醛的混合固定液。室温固定两小时左右后,放入4℃保存运输(如果是植物或者肺组织,则需要进行真空抽气固定,一般需要抽气固定24小时左右,直至标本完全沉入容器底部)。

        3、锇酸后固定:将标本从固定液中取出,用0.1mol/L的PB清洗并过夜,第二天转入1%锇酸后固定,固定时间普通标本2h左右,植物标本8至12h左右。

       4、脱水:锇酸固定后的标本用用0.1mol/L的PB清洗后使用梯度乙醇脱水,浓度依次是50%、70%、80%、90%、95%、100%,植物标本则会在50%乙醇前面再增加一个30%乙醇梯度,脱水时间普通标本为10~15min,植物标本脱水时间为1~1.5h4、浸透:用丙酮作为乙醇和树脂间的过度溶剂,从纯丙酮开始,中间经过丙酮和树脂的混合剂,混合比例丙酮从高到低到纯树脂,整个浸透过程需要1~2天完成。

       5、包埋:先将组织对应的标签放包埋板中,然后加入树脂,再将浸透好的样本放入包埋板中,调整好包埋面,然后放入恒温箱内熟化,熟化过程需要2~3天。熟化完成后,样本树脂包埋完成。



注意事项:

        标本编号尽量简洁

        1、 动物组织样本:1-3min内取样,取样组织米粒大小,尽量薄,部位精准,如来不及修整组织大小可先于电镜固定液内固定半小时左右待组织变硬以后再修整组织进行后固定。

       2、 植物组织样本 :取材要求同动物组织样本,尽量取较嫩的部位。组织投入固定液后需要进行真空抽气让组织沉底,如无条件抽气可用滤纸将组织塞进固定液内

       3、 细胞样本:贴壁细胞:培养好的细胞弃培养基不经漂洗迅速加电镜固定液用细胞刮轻轻刮下细胞收集到离心管内(对细胞形态无要求的可以用胰酶消化细胞),离心收集细胞要肉眼可见细胞沉淀芝麻至绿豆大小(1000转,5min),弃固定液后加新的电镜固定液室温固定2h,再转移至4°保存

       4、 悬浮细胞:离心收集细胞要肉眼可见细胞沉淀芝麻至绿豆大小,弃培养基后加电镜固定液室温固定2h,再转移至4°保存

细菌样本:长于固体培养基的细菌:连带着培养基一起挑下细菌放于电镜固定液内室温固定2h,再转移至4°保存

       5、 悬浮细菌孢子等:离心收集细菌要肉眼可见细菌沉淀芝麻至绿豆大小,弃培养基后加电镜固定液室温固定2h,再转移至4°保存

       6、 有磁性的样本不接


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