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ZC1068 免疫组化

“90分钟一 步法”ELISA试剂盒,节约时间,减少污染,避免误差,高效灵敏

实验收费标准:


项目编号项目名称计价单位单价

ZC1068

免疫组化

35元



实验结果展示:

免疫组化.png


实验流程:

  石蜡切片免疫组化实验步骤:

       1、 石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸馏水洗。

       2、 抗原修复:组织切片置于盛满EDTA抗原修复缓冲液(PH9.0)的修复盒中于微波炉内进行抗原修复,中火8min至沸,停火8min保温再转中低火7min,此过程中应防止缓冲液过度蒸发,切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。

       3、 阻断内源性过氧化物酶:切片放入3%过氧化氢溶液(双氧水:纯水=1:9),室温避光孵育25 min,将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。

       4、 BSA或者血清封闭:切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈(防止抗体流走),在圈内滴加用3%BSA或者10%正常兔血清均匀覆盖组织,室温封闭30min。(一抗是山羊来源用10%正常兔血清封闭,一抗其它来源的用3%BSA封闭)

       5、 加一抗:轻轻甩掉封闭液,在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗,切片平放于湿盒内4°C孵育过夜。(湿盒内加少量水防止抗体蒸发)

       6、 加二抗:玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的二抗(HRP标记)覆盖组织,室温孵育50min。

       7、 DAB显色:玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下控制显色时间,阳性为棕黄色,自来水冲洗切片终止显色。

       8、 复染细胞核:Harris苏木素复染3min左右,自来水洗,1%的盐酸酒精分化数秒,自来水冲洗,氨水返蓝,流水冲洗。

       9、 脱水封片:将切片依次放入75%酒精6min-85%酒精6min --无水乙醇Ⅰ6min -无水乙醇Ⅱ6min -二甲苯Ⅰ5min 中脱水透明,将切片从二甲苯拿出来稍晾干,中性树胶封片。

      10、 显微镜镜检,图像采集分析。




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