脂氧合酶（LOX）检测｜茁彩生物

脂氧合酶（LOX）是一种广泛存在于植物体中含非血红素铁的氧化还原酶，作为植物十八碳酸代谢途径的关键酶，能够专一性催化多元不饱和脂肪酸的加氧反应，生成具有共轭双键的过氧化氢物，直接或间接参与植物的生长、发育、成熟和衰老的调控过程，对植物的生长发育及对环境胁迫的反应具有重要的影响。

脂氧合酶（LOX）是臭氧、病原菌和机械伤害等外界刺激下植物产生的重要酶类。测定植物LOX活性能够为植物病理学、生物化学和分子生物学等领域提供研究数据。

LOX活性的检测方法有很多，其中，紫外分光光度法被证实为一种简便、准确和敏感的方法。在该方法中，LOX活性的检测是通过测定反应物-亚油酸的氧化程度来进行的。实验中，常用的检测波长为234 nm，因为在这个波长下亚油酸的吸收较强。同时，在反应过程中，反应物的吸收会逐渐降低，而生成物-13-羟基-9,11-眼前二十三酸的吸收则会逐渐增加。通过比较反应前后产生的吸光度变化，可以计算出LOX活性。

操作步骤：

一、粗酶液提取：

按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。16000g，4℃离心20min，取上清置冰上待测。

二、测定：

1. 分光光度计预热30 min，调节波长到234 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂二在25℃水浴中预热30 min。

3. 空白管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL蒸馏水、800μL试剂二和100μL试剂三，迅速混匀后于234nm比色，记录15s和75s的吸光值，分别记为A1和A2。

4. 测定管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL上清液、800μL试剂二和100μL试剂三，迅速混匀后于234nm比色，记录15s和75s的吸光值，分别记为A3和A4。

注意：空白管只需测定一次。