柠檬酸（CA）检测｜茁彩生物

柠檬酸（Citric Acid, CA），又称枸橼酸，是一种重要的有机酸，在自然界中分布很广，天然的柠檬酸存在于植物如柠檬、柑橘、菠萝等果实和动物的骨骼、肌肉、血液中。很多种水果和蔬菜，尤其是柑橘属的水果中都含有较多的柠檬酸，特别是柠檬和青柠含有大量柠檬酸。

目前，可采用分光光度法检测柠檬酸（CA）的含量。

分光光度法是基于物质对光的吸收特性进行的。当光线穿过物质时，会被物质吸收，且吸收程度与物质的浓度成正比。因此，通过测量光线通过物质时的吸光度，可以确定物质的浓度。在 CA 含量检测中，常用的分光光度法包括比色法、吸光光度法等。

一、样品中柠檬酸提取：

a. 液体样品中柠檬酸提取：取 0.1mL 液体加试剂一 0.9mL，充分混匀，11000g/min 4℃离心 10min， 取上清液，待测。

b. 组织中柠檬酸提取：称约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一，冰上充分研磨，11000g/min 4℃离心 10min，取上清液，待测。

c. 线粒体中柠檬酸提取：称约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一，冰上充分研磨，600g/min，4℃离心5min；取上清至另一 EP 管中，11000g/min，4℃离心 10min，弃上清（此上清液可用于细胞质CA 含量测定）；向沉淀中加试剂二 200µL，以及试剂三 2µL，充分悬浮溶解，11000g/min，4℃离心 10min，取上清液，待测。

二、测定：

1. 分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 545 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂一置于 30℃水浴中预热 30min 以上。

3. 按下图在 1.5mLEP 管中加入相应试剂