实验收费标准:
项目编号 | 项目名称 | 计价单位 | 单价 |
ZC1076 | tunel(白光) | 张 | 150元 |
实验结果展示:
实验流程:
石蜡切片tunel实验步骤:
1、 石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸馏水洗。(冬天适当延长脱蜡时间)
2、 修复:切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈(防止液体流走),在圈内滴加蛋白酶K工作液(蛋白酶K储存液用PBS 1:9稀释)覆盖组织,37度温箱孵育30min。将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。
3、 破膜:切片稍甩干后在圈内滴加破膜工作液覆盖组织,常温下孵育20min,将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。
4、 加试剂1,2:按片子数量和组织大小取tunel试剂盒内适量试剂1 (TdT) 和试剂2(dUTP)按2:29混合(试剂1,2为现配现用),加到圈内覆盖组织,切片平放于湿盒内,37℃恒温孵育2小时,湿盒内加少量水保持湿度。
5、 阻断内源性过氧化物酶:将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片放入用甲醇配制的3%过氧化氢溶液(过氧化氢:甲醇=1:9)室温避光孵育15 min,将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。
6、 加试剂3:切片稍甩干后,每张切片加适量试剂3(converter-POD)覆盖组织,切片平放于湿盒内,37℃温箱孵育30min。将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。
7、 DAB显色:切片稍甩干后在圈内滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下控制显色时间,阳性为细胞核呈棕黄色,自来水冲洗切片终止显色。
8、 复染细胞核:Harris苏木素复染3min左右,自来水洗,1%的盐酸酒精分化数秒,自来水冲洗,氨水返蓝,流水冲洗。
9、 脱水封片:将切片依次放入75%酒精6min-85%酒精6min --无水乙醇Ⅰ6min -无水乙醇Ⅱ6min -二甲苯Ⅰ5min 中脱水透明,将切片从二甲苯拿出来稍晾干,中性树胶封片。