ZC1105 Real-time PCR QPCR
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实验收费标准：
| 项目编号 | 项目名称 | 计价单位 | 单价 |
ZC1105 | Real-time PCR | 个 | 100元 |
实验结果展示：
实验流程：
荧光定量PCR实验步骤：
1、总RNA抽提（枪头和离心管均经过湿热灭菌，无RNA酶）
①取匀浆器，加入1ml的Trizol Reagent，置冰上预冷。
②取100mg组织，加入到匀浆器中。
③充分研磨直至无可见组织块。
④13000g离心10min取上清。
⑤加入250 μl，颠倒离心管15s，充分混匀，静置3min。
⑥4℃下13000g离心8min。
⑦将上清转移到一新的离心管中，加入0.8倍体积的异丙醇，颠倒混匀。
⑧-20℃放置15min。
⑨4℃下13000g离心10min，管底的白色沉淀即为RNA。
⑩吸除液体，加入75%乙醇1.5ml洗涤沉淀。
⑪4℃下13000g离心5min。
⑫将液体吸除干净，将离心管置于超净台上吹3min。
⑬加入20μl无RNA酶的水溶解RNA。
⑭55℃孵育5min。
2、反转录（枪头和PCR均经过湿热灭菌，无RNA酶）
①取一PCR管，加入含2μg RNA的溶液。
②加入1μl oligo(dT)15。
③用无核糖核酸酶的去离子水补足至12μl。
④于PCR仪上70℃保温5min，迅速置冰上冷却。
⑤依次加入4μl 5×buffer，2μl 10mM dNTPs，1μl RNA inhibitor和1μl 反转录酶，用枪抽吸混匀。
⑥于PCR仪上42℃保温60min，结束后80℃保温5min灭活反转录酶。
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