产品介绍
离心式快速脱盐预装柱,填料颗粒粒径在 57-80 微米,适合将分子量在 5000 以下的和分子量 5000 以上的物质分离开来,对盐和小分子的滞留率在 95%以上,几乎等体积回收,样品不会被稀释,可以在出色地完成蛋白质脱盐的同时保持极高的回收率。无需装柱,代替比较耗时的传统透析处理,以达到快速纯化蛋白质/替换蛋白质缓冲液的目的。只需简单的几次离心,即可完成样品的脱盐或缓冲液置换实验。
产品用途
1、脱盐
2、置换缓冲液产品规格
柱体积:6 毫升; 上样量:0.5-2 毫升工作环境
PH:2-13;温度:4-30ºC 存储液
存贮液含 20%乙醇
产品特点
1、操作方便,免去了繁琐的透析过程,10 分钟内即可完成样品处理。
2、建议一次性使用(也可再生后重复使用),稳定性好,在所用常用缓冲液体(PBS,Tris-Cl、碳酸钠-碳酸氢钠等)中稳定。
3、使用灵活,可根据自身样品体积来适当增减柱体积。
操作步骤
1、移去封口。将两端封口去掉,放入 50ml 离心管中。
2、离心去除储存液。选择水平转子适配器离心机,1000×g 离心 2min,去除储存液。
3、平衡预装柱。加入 5ml 样品所需的缓冲液,静置 30S,1000×g 离心 2min。再加入 2ml 上述缓冲液,重复上述平衡操作一次。
4、样品处理。加入需要处理的蛋白样品,静置 30S,1000×g 离心 2min,收集回收样品。
5、脱盐柱的再生和保存
将使用过的脱盐柱,2 次加入 3ml 0.5M NaOH 溶液,静置 2min,1000×g 离心 2min。然后 3 次加入 3ml 去离子水,静置 2min,1000×g 离心 2min。
将处理好的脱盐柱,加入 20%乙醇溶液,保存即可。
回收效果
样品脱盐后的回收率与样品的浓度,以及上样体积相关。样品浓度越高,其回收率越高;同时在推荐的样品上样量范围内,上样量约大,其回收率也会随之升高。通常脱盐后蛋白的回收率在 80-95%。
注意事项
1、样品处理量要在柱子处理范围内,过多会导致脱盐不完全,过少会导致样品回收率下降;
2、填料在高浓度醇溶液或饱和盐溶液中会有失水收缩现象,请勿将上述溶液进行过柱;
3、加样时尽量均匀加至管中心位置;
4、当样品浓度过低时,需先将样品浓缩到所需体积或所需浓度。
常见问题
常见问题 | 可能原因 | 解决方法 |
蛋白回收率偏低 | 1、蛋白浓度过低(<0.01mg/ml) 2、所置换的缓冲液成分或 PH 非最适缓冲液,产生了非特异性吸附 | 1、县对蛋白液进行适当浓缩后脱盐 2、更换适合的缓冲液,并充 分平衡预装柱 2-3 次 |
蛋白回收后出现浑浊或沉淀 | 1、缓冲液非最适缓冲液 2、缓冲液中的某些离子被除去了, 导致蛋白质等电点聚沉 | 更换适合的缓冲液,并充分平衡预装柱 2-3 次 |
脱盐不干净 | 盐离子浓度过高(>0.5M) | 根据盐离子浓度适当增加脱 盐次数或稀释后脱盐 |