▎ 检测原理
线粒体是细胞呼吸的主要场所,细胞活动所需的能量主要由在线粒体内进行的氧化所产生的能量来供应。制备线 粒体的关键是保持线粒体的完整性和纯度,可通过分级分离法获得,即先低俗出去细胞核以及细胞碎片,再进行高速 梯度离心分离线粒体。
组织线粒体分离试剂盒(Tissue Mitochondria Isolation Kit)是快速便捷分离动物组织中的线粒体的试剂盒,分离 线粒体的同时可以获得去除线粒体的细胞浆蛋白,可用于分析细胞色素 C 等线粒体蛋白向胞浆的释放,大部分获得的 线粒体都含有完整的内膜和外膜,并具有线粒体的生理功能(如检测线粒体膜电位),获得的蛋白可用于 SDS-PAGE、 Western、双向电泳等蛋白分析。该试剂盒可用于从动物软组织(如脑、肝脏)和硬组织(心肌、骨骼肌)中提取线粒体, 对于采用该试剂盒提取硬组织线粒体效果不佳者,建议采用 ZCIBIO 硬组织线粒体分离试剂盒。
该试剂盒仅用于科研 领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
▎ 注意事项
1、试剂 (如 PMSF)对于不同实验不必全部使用,在实验条件成熟后可以不必使用。
2、如果不是用于制备线粒体蛋白,Mitochondria Lysis buffer 不必加入 PMSF。如果用于制备线粒体蛋白样品, Mitochondria Lysis buffer 需添加 PMSF。PMSF 一定要在试剂加入到样品中前 1~2min 内加入,以免 PMSF 在 水溶液中很快失效。
3、分离线粒体的所有步骤均需在冰上或 4℃进行,所用溶液需冰浴或 4℃预冷,全部操作时间尽量控制在 1h 以内。
4、通常在分离线粒体时前后两次离心速度选取 1000g 和 12000g,如果希望纯度更高,但对线粒体的得率要求不 高,前后两次离心速度可用 2000g 和 6000g。 5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
▎ 有效期
12 个月有效