zebra fish ML ELISA KIT （斑马鱼黑色素定量检测试剂盒 ELISA ）

▎  用途

该试剂盒采用竞争法检测血清、血浆、细胞培养上清液中ML的浓度。

▎  检测原理

本试剂盒采用竞争法酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被抗斑马鱼黑色素（ML）抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入斑马鱼黑色素（ML）校准品和待测样本，再加入HRP标记的斑马鱼黑色素（ML）抗原（酶标抗原），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体-酶标抗原的免疫复合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M 硫酸）作用下，最终转化为黄色，在酶标仪450nm波长上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中斑马鱼黑色素（ML）的浓度负相关。拟合校准品曲线，可以计算出样本中斑马鱼黑色素（ML）的浓度。

▎  特异性

可检测样本中的 ML, 且与其它类似物无明显交叉反应。

▎  重复性

板内，板间变异系数均<10%。

▎  标曲图

▎  批内差

取同批次试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测，每份样本连续测定20次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。

▎  批间差

选取3个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本定量测定，每个样本使用同一试剂盒重复测定8次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值

▎  精密度

精密度用样品测定值的变异系数CV表示。CV（%）=SD/mean×100  CV<10% Inter-批间差: CV<13%

▎  稳定性

经测定，试剂盒在有效期内按推荐温度保存，其活性降低率小于5%。
为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响，实验室的环境条件需尽量保持一致，尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。

▎  试剂盒的组成

▲未开封试剂盒，4℃保存；已开封，标准品-20℃保存，酶标板加干燥剂后密封-20℃保存，其他4℃保存。

▎  实验所需自备物品

1、450±10nm滤光片酶标仪（建议仪器使用前预热）  

2、高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL.   

3、Eppendorf 移液器.   

4、蒸馏水或去离子水.   

5、脱脂棉吸水纸.   

6、37℃恒温箱.  

7、100ml和1000ml量筒.