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甲苯胺蓝染色(蛋白质染色)ㅣ茁彩生物

2023-05-24 375

甲苯胺蓝染色法是一种常用的蛋白质染色方法,它可以用于检测蛋白质的存在和定量。该方法基于蛋白质与甲苯胺蓝(CoomassieBrilliant Blue)染料的相互作用,通过染色反应来检测蛋白质。


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甲苯胺蓝是一种有机染料,它具有强烈的吸附性和亲和性,可以与蛋白质中的氨基酸残基(主要是赖氨酸、精氨酸和组氨酸)发生静电作用和氢键作用,形成染色复合物。这种染色复合物可以在紫外线下发出蓝色荧光,从而实现蛋白质的检测和定量。



甲苯胺蓝染色法具有灵敏度高、操作简便、成本低廉等优点,因此被广泛应用于生物化学、分子生物学、生物医学等领域。但是,该方法也存在一些局限性,如染色效果受蛋白质种类和含量的影响,染色后的蛋白质不能再次利用等。因此,在实际应用中需要根据具体情况选择合适的染色方法。


实验流程:

1、石蜡切片脱蜡至水。

2、切片浸入甲苯胺蓝溶液1-5min(软骨和肥大细胞着色较快,染1min软骨和肥大细胞即呈鲜艳的紫红色,其他成分和细胞着浅蓝色;尼氏体着色较慢需染3-5min,神经元内的尼氏体着深蓝色,背景几乎无色。如着色不够可稍微延长染色时间。)

3、水洗洗去多余染料(蓝色在水里的时间过长也会稍许褪色)

4、脱水:无水乙醇I 2-5min-无水乙醇II 2-5min-无水乙醇III 2-5min-正丁醇2min-二甲苯透明数分钟湿封。


结果判读:

    可见尼氏小体深蓝色颗粒,细胞核呈淡蓝色,背景基本无色;或是肥大细胞呈紫红色,背景浅蓝色或是无色。 


注意事项:

1、染完色的片子不要烤干后二甲苯透明封片,否则片子上极易出现水珠;

2、脱水的酒精最好用干净的无水乙醇含水量不能太高否则易脱色;

3、染色时可稍过染,因为在脱水的过程中蓝色或紫红色会缓慢褪色,如果背景过深可稍微延长脱水时间至肉眼看组织为极浅蓝色或近乎无色。但脱水时间也不能太长否则颜色会全部脱色,并且肥大细胞的紫红色会变成蓝色。





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